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DNA測序儀試劑器材

    DNA序列測定分手工測序和自動測序,手工測序包括sanger雙脫氧鏈終止法和maxam-gilbert化學降解法。自動化測序實際上已成為當今 dna序列分析的主流。美國pe abi公司已生產出373型、377型、310型、3700和3100型等dna測序儀,其中310型是臨床檢測實驗室中使用*多的一種型號。
  1.bigdye測序反應試劑盒 主要試劑是bigdye mix,內含pe磚利四色熒光標記的ddntp和普通dntp,amplitaq dna polymerase fs,反應緩沖液等。
  2.pgem-3zf (+) 雙鏈dna對照模板 0.2g/l,試劑盒配套試劑。
  3.m13(-21)引物 tgtaaaacgacggccagt,3.2μmol/l,即3.2pmol/μl,試劑盒配套試劑。
  4.dna測序模板 可以是pcr產物、單鏈dna和質粒dna等。模板濃度應調整在pcr反應時取量1μl為宜。本實驗測定的質粒dna,濃度為0.2g/l,即200ng/μl。
  5.引物 需根據所要測定的dn**段設計正向或反向引物,配制成3.2μmol/l,即3.2pmol/μl。如重組質粒中含通用引物序列也可用通用引物,如m13(-21)引物,t7引物等。
  6.**去離子水或三蒸水。
  7.0.2ml或和0.5ml的pcr管 蓋體分離,pe公司產品。
  8.3mol/l 醋酸鈉(ph5.2) 稱取40.8g naac·3h2o溶于70ml蒸餾水中,冰醋酸調ph至5.2,定容至100ml,高壓**后分裝。
  9.70%乙醇和無水乙醇。
  10.naac/乙醇混合液 取37.5ml無水乙醇和2.5ml 3mol/l naac混勻,室溫可保存1年。
  11.pop 6測序膠 abi產品。
  12.模板抑制試劑(tsr) abi產品。
  13.10×電泳緩沖液 abi產品。
  14.abi prism 310型全自動dna測序儀。
  15.2400型或9600型pcr儀。
  16.臺式冷凍高速離心機。
  17.臺式高速離心機或袖珍離心機。

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